基金專案：檸檬鱗傘生物學特性與馴化栽培
基金專案：湖北省中央引導地方科技發展專項（２０１９ＺＹＹＤ０３９ ）、現代農業產業技術體系建設專項（ ＣＡＲＳ － ２０ ）、湖北省食用菌產業技術體系（２０２１ － ２０２４ ）綜合試驗站專案（ ＨＢＨＺＤＺＢ － ２０２１ － ０２３ ）和湖北省生物多樣性本底調查觀測評估專案
蔡 婧等
檸檬鱗傘（ Ｐｈｏｌｉｏｔａ ｌｉｍｏｎｅｌｌａ ）屬於擔子菌門（ Ｂａｓｉｄｉｏｍ ｙ ｃｏｔｉｎａ ）、層菌綱（ Ｈ ｙ ｍｅｎｏｍ ｙ ｃｅｔｅｓ ）、傘菌目（ Ａ ｇ ａｒｉｃａｌｅｓ ）、球蓋菇科（Ｓｔｒｏ ｐ ｈａｒｉａｃｅａｅ ）、鱗傘屬（ Ｐｈｏｌｉｏｔａ ） ，分佈於中國東北 、美國東部 以及荷蘭 等地。檸檬鱗傘為木腐菌，通體橙黃色，成簇生長在枯樹上 ，暫無有毒記錄。鱗傘屬為廣佈屬，全世界約 １５０ 種 。我國已知的鱗傘屬真菌有 ６８ 種 。鱗傘屬真菌不僅營養價值高，含有氨基酸、維生素、蛋白質及多糖等物質 ，還具有增強免疫力、抗腫瘤和抗氧化作用 。鱗傘屬真菌種類較多，但馴化栽培成功的較少，已馴化成功的有多脂鱗傘（Ｐ . ａｄｉ ｐ ｏｓａ ）、小孢鱗傘（Ｐ . ｍｉｃｒｏｓ ｐ ｏｒａ ）、尖鱗傘（ Ｐ . ｓｑ ｕａｒｒｏｓｏｉｄｅｓ ）、白鱗傘（Ｐ . ｄｅｓｔｒｕｅｎｓ ）、翹鱗傘（Ｐ . ｓ ｑ ｕａｒｒｏｓａ ） 等。目前小孢鱗傘與多脂鱗傘已實現商業化栽培。筆者首次開展了檸檬鱗傘生物學特性和人工馴化栽培研究，以期為檸檬鱗傘的開發利用提供參考。
１ 材料與方法
１．１菌株來源及分子鑑定
檸檬鱗傘 （ Ｐ . ｌｉｍｏｎｅｌｌａ ）子實 體（圖１）採自湖北省十堰市房縣土城鎮白雞鋪村（北緯 ３２°２３ ' ２９ "，東經 １１０°７２ ' ２６"，海拔 ４６８ｍ ），參照文獻的方法，將野生菌株子實體進行組織分離，得到供試菌株。
圖１ 野生檸檬鱗傘子實體
參考文 獻 的 方 法，利 用 ＩＴＳ１（ ＴＣＣＧＴＡＧＧＴＧＡＡＣＣＴＧＣ ）和 ＩＴＳ４（ ＴＣＣＴＣＣＧＣＴＴＡＴＴＧＡＴＡＴＧＣ ）通用引物對檸檬鱗傘子實體分離菌株純化菌絲 ＤＮＡ 進行 ＰＣＲ 擴增，所用引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，擴增產物由湖北擎科生物科技有限公司進行測序，並將測序 獲 得的 ＩＴＳ 序 列 與 ＮＣＢＩ數 據 庫 收 錄 序 列 進 行 ＢＬＡＳＴ 比 對 分 析。自 測 序 列 和ＧｅｎＢａｎｋ下載的相關序列用 ＭＥＧＡ５．０５進行系統發育分析，用 ＮＪ （ ｎｅｉ ｇ ｈｂｏｒ － ｊ ｏｉｎｉｎ ｇ ）法構建系統發育樹，進行 １０００ 次自展抽值檢驗系統發育樹可靠性。
１．２生物學特性研究
１．２．１不同溫度對菌絲生長的影響
將一個檸檬鱗傘菌絲塊（直徑０．８ｃｍ ）接入ＰＤＡ平板（直徑９ｃｍ ）中央，分別置於５ 、 １０ 、 １５ 、 ２０ 、 ２５ 、３０ 、 ３１ 、 ３２ 、 ３３ 、 ３４ 、 ３５℃培養箱培養，每組５個重複，觀察菌絲長勢，採用十字交叉法每兩天在相同時間段內測量菌絲生長直徑，當有菌絲長滿時，停止測量，計算菌絲生長速度。
１．２．２不同碳源對菌絲生長的影響
碳源培養基配方為 ２０ ｇ 碳源、 ２ ｇ 磷酸二氫鉀、 ２ ｇ 七水硫酸鎂、 ２０ ｇ 瓊脂， １Ｌ 蒸餾水。實驗碳源分別為葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、果糖、澱粉，以不加碳源為對照，每組５個重複，將一個直徑為０．８ｃｍ 的檸檬鱗傘菌絲塊接於ＰＤＡ平板（直徑９ｃｍ ）中央，置於２５℃培養箱中培養，觀察菌絲長勢，按１．２．１的方法測定菌絲生長速度。
１．２．３ 不同氮源對菌絲生長的影響
氮源培養基配方為 ２ ｇ 氮源、 ２ ｇ 磷酸二氫鉀、 ２ ｇ 七水硫酸鎂、 ２０ ｇ 瓊脂， １Ｌ 蒸餾水。實驗氮源分別為酵母浸粉、牛肉膏、蛋白腖、硝酸鉀、尿素、草酸銨，以不加氮源為對照，每組 ５ 個重複，將一個直徑為０．８ｃｍ 的檸檬鱗傘菌絲塊接於ＰＤＡ平板（直徑９ｃｍ ）中央，置於２５℃溫培養箱中培養，觀察菌絲長勢，按 １．２．１ 的方法測定菌絲生長速度。
１．２．４ 不同 ｐ Ｈ 對菌絲生長的影響
選用 ＰＤＡ 培養基，用 ０．１ｍｏｌ· Ｌ －１ ＮａＯＨ 和 ０．１ｍｏｌ · Ｌ －１ ＨＣｌ 將滅菌後培養基 ｐ Ｈ 分別調節到５．５ 、 ６．０ 、 ６．５ 、 ７．０ 和 ７．５ ，每組 ５ 個重複，將一個直徑為 ０．８ｃｍ 的檸檬鱗傘菌絲塊接於 ＰＤＡ 平板（直徑 ９ｃｍ ）中央，置於 ２５℃ 培養箱中培養，觀察菌絲長勢，按 １．２．１ 的方法測菌絲生長速度。
１．３ 馴化栽培
採用 １５ｃｍ×３０ｃｍ 聚乙烯折角栽培袋，裝入培養料（ ８０％ 闊葉樹木屑、 １９％ 麩皮、 １％ 石膏，含水量６０％ ），每袋裝 ０．７５ｋ ｇ 溼料，共計 ２０ 袋， １２１℃ 滅菌 ２ｈ ，待袋內培養料溫度冷卻到 ２８℃ 以下時開始接種。每袋接入 ５ ｇ 檸檬鱗傘菌絲塊，接種後將菌袋移入培養室，於（ ２５±１ ） ℃ 、黑暗條件下培養，測量菌絲生長速度 ，待菌絲長滿袋後記錄生長時間。將菌袋轉移至出菇房，自然條件下開袋出菇，出菇期間環境溫度為 １０～２２℃ ，相對溼度 ＞９０％ ，光照 ０～１２５ｌｘ 。記錄原基形成時間，子實體採收時間，並計算產量和生物學效率。
１．４栽培子實體的形態特徵觀察
用解剖刀縱切人工栽培的新鮮檸檬鱗傘子實體，觀察其菇蓋結構、菌肉顏色和質地，菌褶形狀和著生情況，菌柄質地、中實或中空等特徵；將菌褶放在潔淨的載玻片中央，用乳酸酚棉蘭染色，加蓋玻片在光學顯微鏡下觀察孢子、擔子和菌褶（菌髓）等的形態特徵。
２ 結果與分析
２．１ 菌株分子鑑定結果
檸檬鱗傘ＩＴＳ序列長度為６９６ｂ ｐ ， ＧｅｎＢａｎｋ登入號為 ＭＺ１４８５７９ 。透過構建系統發育樹，其與已報道的檸檬鱗傘在一個分支裡，支援率為９９％ ，研究結果支援它們為同一物種（圖２ ）。檸檬鱗傘和多脂鱗傘親緣關係最近。結合形態學初步鑑定結果，所測菌株鑑定為檸檬鱗傘。
圖２ 基於ＩＴＳ序列構建的系統發育樹
２．２ 生物學特性
２．２．１不同溫度對菌絲生長的影響
由表１可知，在不同溫度下培養，檸檬鱗傘菌絲生長速度和長勢有所不同。檸檬鱗傘菌絲在５ ℃能生長，３４℃停止生長，生長最適溫度為２５℃ 。
表 １ 不同溫度對菌絲生長的影響
資料為平均值 ± 標準誤（ ｎ＝５ ）；不同小寫字母表示差異顯著（ Ｐ ＜０．０５ ）； ＋ ：菌絲稀疏， ＋＋ ：菌絲密， ＋＋＋ ：菌絲濃密
２．２．２不同碳源對菌絲生長的影響
不同碳源對檸檬鱗傘菌絲生長速度和長勢的影響見表２ 。碳源為麥芽糖或蔗糖時，菌絲濃密且生長速度較快。
表２ 不同碳源對菌絲生長的影響
注同表 １
２．２．３不同氮源對菌絲生長的影響
不同氮源對檸檬鱗傘菌絲生長速度和長勢的影響見表３ 。氮源為硝酸鉀時，菌絲生長速度最快，不同氮源下菌絲長勢相同。
表３ 不同氮源對菌絲生長的影響
注同表 １
２．２．４不同 ｐ Ｈ 對菌絲生長的影響
不同 ｐ Ｈ 對檸檬鱗傘菌絲生長速度和長勢的影響見表４ 。在實驗範圍內， ｐ Ｈ 為７．０時，菌絲濃密且生長速度最快。
表 ４ 不同ｐＨ對菌絲生長的影響
注同表 １
２．３馴化栽培結果
菌袋中菌絲生長速度為（ ０．３１±０．０３ ） ｃｍ · ｄ－１，約６０ｄ 後菌絲滿袋；開袋 ２５～３０ｄ 後形成原基，３５～４０ｄ後子實體成熟。從接種到第一潮子實體採收需９０～１００ｄ ，本實驗僅採收第一潮菇，每袋產量為（７２．０４±１３．３８ ） ｇ ，平均生物學效率為２４．０１％ 。
２．４ 栽培子實體形態學觀察結果
檸檬鱗傘人工栽培子實體與野生子實體 相比，形態特徵基本一致，但人工栽培檸檬鱗傘的菌蓋圓潤、色深，菌柄粗長（圖３ ）。人工栽培子實體菌蓋直徑４～７ｃｍ ，呈凸鏡或近平展，初期呈紅褐色，成熟後逐漸變為檸檬黃色，具散生的黃褐色與白色鱗片，黏。菌肉厚度 ４～７ｍｍ ，淡黃色。菌褶 ３．５～４．８ｍｍ ，直生至稍彎生，近白色，逐漸變為鐵鏽色，窄，密。菌柄長５～１２ｃｍ ，粗４～９ｍｍ ，上下等粗或下部稍細，灰白色至淺褐色，具散生反捲的黃色鱗片，實心或稍空心。菌環單層，白色，膜質，薄，生於菌柄上部，易消失。顯微特徵（圖４ ）：孢子橢圓形至卵圓形， ４．５～７．２ μ ｍ×３．５～５．２ μ ｍ ，光滑；擔子棒狀，１３．８～２３．１ μ ｍ×３．８～６．３ μ ｍ 。
圖３ 檸檬鱗傘發育過程中的不同形態
Ａ ：幼菇； Ｂ 、 Ｃ ：成熟子實體
圖 ４ 檸檬鱗傘的菌落及顯微形態特徵
Ａ ：菌落； Ｂ ：擔孢子（ ６４０× ）； Ｃ 、 Ｄ ：擔子（ １６００× ）； Ｅ ：菌髓（ １６０× ）
３ 討論
在本實驗範圍內，檸檬鱗傘菌絲最適培養溫度為 ２５℃ ，麥芽糖或蔗糖作為碳源時菌絲生長快且濃密，硝酸鉀為氮源時菌絲生長最快，最適 ｐ Ｈ 為 ７．０ 。在碳源實驗中發現，大多數真菌適宜生長的葡萄糖並不適合檸檬鱗傘生長，菌絲適合在雙糖培養基上生長，這和在多脂鱗傘、翹鱗傘上的研究結果一致 。與野生檸檬鱗傘子實體相比，人工栽培檸檬鱗傘具有菌蓋圓潤、菌蓋中部顏色更深，菌柄粗長等性狀，這與栽培過程中光照、溫度和溼度等環境因素有關。檸檬鱗傘的栽培尚停留在實驗室階段，存在產量低、形態差別大等問題，今後應進一步最佳化栽培條件，以提高栽培子實體產量和形態的穩定性。
鱗傘屬真菌中部分種類可食用，如多脂鱗傘、小孢鱗傘等；少鱗黃鱗傘（ Ｐ . ａｌｎｉｃｏｌａ ）、金毛鱗傘（Ｐ . ａｕｒｉｖｅｌｌａ ）、楊樹鱗傘（ Ｐ . ｐ ｏ ｐ ｕｌｎｅａ ）等有食用記載 。部分鱗傘屬真菌食用後會產生毒性，如尖鱗傘、翹鱗傘有人食用後引起腹瀉、腹痛 。愷生鱗傘（Ｐ . ａｌｎｉｃｏｌａ ）、黏皮鱗傘（ Ｐ . ｌｕｂｒｉｃａ ）、地鱗傘（ Ｐ . ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ ）、燒地鱗傘（ Ｐ . ｈｉｇ ｈｌａｎｄｅｎｓｉｓ ）和黃鱗傘（ Ｐ . ｆ ｌａｍｍａｎｓ ）被記載有毒 。檸檬鱗傘尚無有毒記載，其食用性有待進一步研究。
