細胞復甦是指將凍存在液氮裡邊或者-80℃冰箱中的細胞解凍，再培養傳代。細胞復甦應採用快速融化的方法，這樣的目的是為了讓細胞外結晶在很短的時間內融化，從而避免慢悠悠的融化，使得水分滲入細胞內再結晶，從而對細胞再次造成傷害，從而影響細胞的存活率。
由於各種細胞的培養方式大概不太一樣，所以就不再詳細介紹，今天僅僅說一下細胞復甦的一個大概的注意事項，給各位稍微提個醒。
- 快速融化的真實原因則是為了防止小冰晶形成大的冰晶，也就是冰晶的一個重結晶。也就是意味著從液氮中取出來的凍存管，要立即浸入37℃溫水中，儘量在1min內融化。
- 解凍後的細胞直接接種於含有完全培養基的細胞培養瓶或者培養皿中直接培養，過夜後進行換液，目的是將凍存液中的DMSO去除掉，但是如果我們所培養的細胞對冷凍保護劑很敏感的話，解凍後的細胞應先透過離心去除保護劑，再接種到含完全培養基的培養瓶或者培養皿中。這裡所提到的離心，無非就倆目的，一個是去除DMSO，一個是去除死細胞。
- 凍存管的炸裂問題。這個是特別需要注意的，以前師姐提醒的時候還沒怎麼注意，直到它在我手裡炸了兩次之後，長記性了。凍存管容易爆炸的原因主要為液氮會滲入到凍存管中，取出後，也但容易揮發，導致體積迅速膨脹，但是又不能及時的排出引起爆炸；或許是凍存管質量差，或者蓋子沒擰緊。針對於這個問題可以從以下幾個方面稍微避免一下：（1）取放置凍存管的凍存盒的時候要戴好防凍手套以及護目鏡，準備好鑷子；（2）推薦使用內旋的凍存管，畢竟內旋的凍存管，易於排出，不宜爆炸；（3）但是如果沒有內旋的，只能用外旋的凍存管的話，取出後儘快倒置/水平放置數十秒，使得液氮流出；（4）可以先放到-80℃的冰箱中，等液氮揮發乾淨後，再去復甦，或者是把管子放置於冰上，等到液氮揮發後，再進行復蘇；（5）平常我自己復甦細胞的時候，都會在地上先放一些吸水紙或者比較吸水的毛巾，取出後立即將存放凍存管的凍存盒側放在上邊，等液氮揮發乾淨後再復甦細胞；（6）關於凍存細胞時，是否貼上封口膜的問題吧，有經驗的呢，都會發現加不加都一樣的。
- 細胞復甦的過程中，很重要的一點就是避免培養基的過度鹼性。建議在放入凍存管內容物之前，將含有培養基的培養容器放入培養基中至少15min，以便培養基達到正常的PH值。有的人會採用預熱的培養基來稀釋凍存的細胞。
- 解凍後的細胞可以直接接種於含完全培養基的細胞培養瓶中直接培養，過夜後再用新鮮的培養基替換，以去除DMSO，但如是細胞對於冷凍保護劑很敏感的話，需要解凍後，先透過離心去除冷凍保護劑，再接種到含有完全生長培養液的培養瓶中。但是有時候需要對離心的時間和轉速需要控制一下，難養的要降低轉速，縮短時間，減少離心對細胞的傷害。但如果要是需要離心的話，解凍速度一定要快，因凍存液中的DMSO對細胞的毒副作用比較大，必須在一分鐘之內完全融化，如果復甦的溫度太慢，就會造成對細胞的損傷
至於復甦後是否成功，需要一個大概的一個標準，要根據接種後細胞的形態和貼壁率而定，倘若第二天有95%以上的細胞貼壁，且形態良好，則說明覆蘇成功。復甦接種的時候，採用較高的接種密度，使細胞的整體密度高一些，有利於細胞的生長。
