由於微衛星不穩定（MSI）在泛癌種中具有明確且重要的臨床檢測意義，現已被國內外眾多臨床指南共識強烈推薦常規檢測。臨床對於MSI的檢測需求越來越明確，是否檢測MSI現已不再是問題，如何選擇檢測位點給患者帶來最準確的檢測結果才更加需要注意。
文章來源：南方醫學網
人類基因組中已知的微衛星位點數目已有1900萬個[1]，而如何在眾多位點中選擇最具有代表性的微衛星位點，國內外指南共識其實早有定論。縱觀國內外指南，明確推薦用於MSI檢測的Panel都是由五個位點組成，即美國癌症研究中心（NCI）提出的由兩個單核苷酸位點和三個雙核苷酸位點組成的2B3D NCI Panel（BAT-26、BAT-25、D5S346、D2S123、D17S250）和由5個單核苷酸位點組成的Promega Panel。並且，5個位點的判定標準也是一致的：5個位點中，2個及以上的位點不穩定為MSI-H；5個位點中1個位點不穩定為MSI-L，5個位點均穩定為MSS[2]。目前沒有任何指南推薦6個及6個以上的單核苷酸位點。
圖 1 NCCN指南明確推薦5個位點組成的兩套Panel以及判定標準
指南共識所推薦的兩套位點中，2B3D NCI Panel從被提出以來一直被指南共識所推薦，其推薦地位從未被動搖。而5個單核苷酸位點Panel還是經過了較為複雜的演進過程，最初是法國人類多型性研究中心基於高加索人群資料提出的Pentaplex Panel（BAT25、BAT26、NR-21、NR-22、NR-24）[3]，該Panel被Revised Bethesda指南推薦[4]。後來，美國Promega公司在Pentaplex Panel上做了進一步改進，將NR-22替換為Mono-27推出了Promega Panel（BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-24、MONO-27）。基於此，NCCN指南推薦2B3D NCI Panel和以Promega Panel為主的5個單核苷酸位點Panel用於MSI檢測，而沒有任何指南推薦6個單核苷酸位點。
表 1 不同檢測Panel指南推薦與臨床研究應用情況
同時，國內外各種PD-1/L1免疫檢查點抑制劑的大型臨床研究入組MSI-H患者的篩選位點都遵循了指南推薦，選擇的2B3D NCI Panel或Promega Panel由5個位點組成的檢測Panel，比如帕博利珠單抗的臨床研究中以上兩種Panel都使用過；納武利尤單抗、阿維魯單抗、德瓦魯單抗的臨床研究則更多使用的是2B3D NCI Panel。而目前公開的資料和研究中，沒有任何臨床研究是用的是5個位點以上的MSI檢測Panel。因此，6個位點的檢測Panel並沒有免疫治療伴隨診斷的資料支援。
圖 2 大型臨床研究採用5個位點的2B3D NCI Panel或單核苷酸位點
近日，市面上有些聲音將某個由6個單核苷酸位點組成的Panel與指南共識推薦和臨床研究中使用的Pentaplex Panel或Promega Panel混同，企圖混淆視聽。可以詳細比較一下Pentaplex Panel、Promega Panel 和6個單核苷酸的Panel。
表 2 單核苷酸Panel位點資訊
可以看出，6個單核苷酸位點與Pentaplex相比，少了NR-22位點，且多了NR-27和MONO-27位點，同時也比Promega Panel多一個NR-27位點。而基於國內人群不同檢測Panel的MSI-H檢出率的META分析結果顯示，6個單核苷酸位點Panel的MSI-H整體檢出率遠低於5個單核苷酸的Promega Panel，所有組合中，檢出率最高的還是2B3D NCI Panel[9]。
表 3 中國人群不同MSI檢測Panel檢出率彙總
那麼同樣是單核苷酸Panel，為什麼6個單核苷酸比Promega的檢出率低呢？我們發現，6個單核苷酸位點相比Promega位點多出了NR-27位點，這個位點是從哪裡來的呢？我們在這一篇發表於Disease Markers（影響因子=3.434）雜誌的文獻中，發現了NR-27的選擇原因。
圖 3 由於NR22位點無法相容，NR27位點引入Pentaplex Panel
在20年前，我們進行MSI檢測時，大多是進行的單重PCR，操作是較為複雜的，於是研究者們希望能夠開發多重PCR在一個單管中完成多個微衛星位點的檢測進而簡化流程。但是，在將Pentaplex Panel與多重PCR技術結合時，研究團隊發現NR-22位點無法與其餘四個位點在同一個單管中相容，因此將NR-27位點引入，替代了Pentaplex的NR-22位點[24]。但是原文中，並沒有闡述為什麼會選擇NR-27，也並沒有對NR-27在人群中的敏感性。
這個NR-27位點在中國人群中並沒有公開的研究資料或文獻報道來證實其檢測效能。而基於國外人群資料顯示，NR-27位點的檢測敏感性僅6%左右[25]，6個位點組合加入NR-27位點很有可能會降低檢測Panel的整體敏感性。並且6個單核苷酸位點的判讀標準是不明確的，因為指南中根本沒有推薦過任何大於5個位點的檢測Panel。這些因素有可能就是6個單核苷酸位點MSI-H檢出率相較5個位點的組合更低，更容易造成漏檢的原因。
圖 4 資料提示NR-27位點靈敏度不高
綜上，無論是經典2B3D還是單核苷酸位點組合，指南推薦和有資料驗證的主流位點都是5個位點組成的Panel，6個位點的檢測panel沒有任何指南推薦，且無任何伴隨診斷的用藥的資料基礎。
參考文獻
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