摘要:
文題釋義:
長鏈非編碼RNA:是一類超過200個核苷酸的非編碼RNA分子,位於細胞核或胞質部分。在大多數情況下,由於缺乏開放的閱讀框架,它們幾乎從不參與蛋白質編碼;相反,它們在RNA水平上調節基因表達;此外,長鏈非編碼RNA還可與轉錄因子蛋白、染色體空間構象或mRNA結合,透過啟用或抑制轉錄因子來調節下游相關基因的表達。
轉染:是真核細胞在一定條件下主動或被動匯入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。從本質上講,和轉化區別不大,因為無論是轉染還是轉化,都是用氯化鈣處理大腸桿菌細胞來提高細胞膜的通透性,再將重組噬菌體DNA直接匯入受體細胞,進入感受態細菌的噬菌體DNA可以同樣複製和繁殖,這種方式稱為轉染。廣義上說,轉染也稱為轉化。常規轉染技術包括瞬時轉染和穩定轉染兩類。
背景:人臍帶間充質幹細胞在體外借助細胞因子可以誘導分化為肝樣細胞,但是形成的肝樣細胞功能上尚不夠成熟。研究發現長鏈非編碼RNA與細胞分化關係密切,並透過干預某些長鏈非編碼RNA的表達達到了促進細胞分化的目的。
目的:探討長鏈非編碼RNA核富集轉錄本1對人臍帶間充質幹細胞向肝細胞分化的影響。
方法:建立人臍帶間充質幹細胞向肝細胞分化體系,用糖原染色和吲哚菁綠攝取實驗評價肝細胞功能特性,qRT-PCR檢測肝細胞特異性基因及核富集轉錄本1的mRNA表達。然後透過構建慢病毒干擾核富集轉錄本1表達,轉染7 d後得到穩定轉染的細胞株,然後進行肝向誘導分化4周,設立轉染空質粒的陰性對照組,未進行病毒轉染的對照組,qRT-PCR、Western blot檢測肝細胞特異性基因和蛋白表達。
結果與結論:①經糖原染色後可見細胞胞質內有紅、紫色糖原顆粒,吲哚菁綠攝取後可見大量深綠色吲哚菁綠陽性細胞;②隨著誘導時間延長,白蛋白、細胞色素酶P450 3A4 mRNA表達量逐漸增加,核富集轉錄本1的mRNA表達量逐漸降低;③與陰性對照組和未轉染對照組比較,在干擾核富集轉錄本1表達後,白蛋白、細胞色素酶P450 3A4 mRNA和蛋白表達均明顯增加;④結果表明,長鏈非編碼RNA核富集轉錄本1可能參與了人臍帶間充質幹細胞向肝細胞的分化。
縮略語:核富集轉錄本1:nuclear-enriched autosomal transcript 1,NEAT1
https://orcid.org/0000-0001-7527-7918 (王丹丹)
中國組織工程研究雜誌出版內容重點:幹細胞;骨髓幹細胞;造血幹細胞;脂肪幹細胞;腫瘤幹細胞;胚胎幹細胞;臍帶臍血幹細胞;幹細胞誘導;幹細胞分化;組織工程
關鍵詞: 長鏈非編碼RNA, NEAT1, 間充質幹細胞, 肝細胞, 分化, 肝細胞特異性基因, 轉染
引用本文: 王丹丹, 禹亞彬, 劉世奇, 嚴雨樓, 張建淮. 人臍帶間充質幹細胞向肝細胞分化過程中長鏈非編碼RNA核富集轉錄本1的作用[J]. 中國組織工程研究, 2022, 26(30): 4847-4851.
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