柱層析是有機合成中最常用的分離純化手段，大公司合成實驗室一般都配備自動化程度比較高的分離純化工具---快速製備色譜儀(中低壓制備色譜)，在醫藥外包公司俗稱過柱機。由名字可知，這就是個替代手工過柱的工具，他所用到的柱子我們常叫它Flash柱。除了可以用來過矽膠正相柱，還可以過乙腈(甲醇）/水體系的C18填料的反相柱，反相柱一定程度上可以替代製備高效液相色譜，特別是大量樣品分離時，可以節省大量成本。
往期文章: 【柱層析技術】中已經詳細介紹了溼法上樣和幹法上樣，文章中主要是介紹了矽膠柱柱層析技術，因此用過柱機過正相矽膠柱時情況類似。
對於乙腈(甲醇）/水體系的C18填料的反相柱，溼法上樣是應用最廣泛，使用最簡單的上樣技術。如果是固體樣品，只需將樣品直接溶解在儘量少的溶劑中，然後注入色譜柱中即可完成上樣，而如果是液體樣品，其上樣方式則會更簡單，直接將樣品注入色譜柱即可。但是溼法上樣有一些缺點：1、當上樣體積增大時，樣品在色譜柱當中所佔用的體積會增大，擴散效應也會明顯增強，導致色帶變寬，降低分離效率，純度也隨之降低；2、請儘量使用大極性的溶劑溶解樣品，如果極性過小，樣品還沒有來得及和固定相相互作用，就已經被極性溶劑洗脫下色譜柱，導致保留時間不夠，洗脫不充分，分離效率大大降低。特別是極性特別大的樣品，溼法上樣後很容易直接把樣品衝出，沒有分離效果。
C18反相柱能否像正相矽膠柱一樣，拌樣後，進行幹法上樣呢？
小編親試，完全可以進行幹法上樣，唯一的缺點就是C18填料有點貴，但是拌樣後的C18填料可以沖洗乾淨後可以重複利用。與矽膠柱的拌樣類似，先用沸點較低溶劑溶解樣品，加入C18矽膠後，旋幹，然後將乾粉轉移到空柱子中，填料上方加上篩板或脫脂棉都可以，旋緊，將上樣柱接在反相柱上直接過柱就可以了（建議先將反相柱平衡好，接上上樣柱後直接執行梯度）。
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反相柱幹法上樣相比溼法有以下優點：一、幹法上樣峰型變窄，分離效果明顯提高。二、另外對於一些溶解度較差的樣品，如果利用溼法上樣，需要用大量的溶劑溶解，因此上樣量受到限制，如果一次上太多，分離效果很差，但幹法上樣克服了此缺點。三、還有一些樣品溼法上樣注入反相柱後，直接從水相比例較高的梯度開始衝柱時，產品會迅速析出，導致柱子堵住，幹法上樣則很少堵柱。四、對於大極性的化合物（LCMS保留時間在0.5min以內的化合物），溼法上樣，有時直接用水相就可以將化合物衝出，用幹法上樣則可以明顯提高柱效以及分離樣品純度。
