在HEP DART 2021大會上，研究人員帶來了在研乙肝新藥重要靶點之一，核酸聚合物（NAP）的研究進展。值得一提的是，目前REP 2139/REP 2165均是基於NAP的開發策略。
乙肝在研新藥REP 2139，抑制HBsAg分泌，作用機理繼續得到證明
一、研究背景
研究人員介紹，核酸聚合物 (NAP) 抑制 HBV 亞病毒顆粒 (SVP) 的組裝和分泌，但不抑制 HBeAg 或 Dane 顆粒。這種寡核苷酸效應是由長度和硫代磷酸酯 (PS) 依賴性疏水相互作用驅動的，與序列或鹼基/糖修飾無關。 NAP 在發生 SVP 形態發生的 ER 後、高爾基體前囊泡 (ERGIC) 的酸化腔中起作用。
在 pH 7.4 的 HepG2.2.15 細胞裂解物中的差異 NAP 相互作用組篩選確定 HSP40 伴侶 DnaJB12 作為 NAP 抑制 SVP 組裝的假定宿主目標。DnaJB12 參與 SVP 組裝已透過 HepG2.2.15 細胞中的 DnaJB12 敲低抑制 HBsAg 但不抑制 HBeAg 分泌得到證實。對酸性 pH 下的 NAP 相互作用進行了持續分析，以檢查 ERGIC 內的生理相關結合活性。
來自：Replicor公司NAPs作用機理
二、研究方法
在 pH 7.4 和 6.5 下對 HepG2.2.15 裂解物中的生物素化 NAP 進行 MS/MS 相互作用組分析。透過活性 REP 2139（40mer PS，疏水性）和 REP 2179（20mer PS）、REP 2147（40mer 磷酸二酯，非疏水性）和 REP 2031（40mer PS 聚C – 疏水但在酸性 pH 下透過均四聚作用滅活）。
透過蛋白質印跡證實了 shRNA 介導的 DNAJB12 敲低。透過 ELSIA 監測對 HBsAg（GS EIA 3.0，Biorad）和 HBeAg（ETI-EBK PLUS N0140，Diasorin）分泌的影響，並將其標準化為總細胞蛋白（如透過 BCA 測定確定）。
三、研究結果
先前確定的酪蛋白激酶 1D (CSNK1D) 的 shRNA 敲低抑制了 HBsAg 和 HBeAg 的分泌。在 pH 6.5 時觀察到 REP 2139:REP 2147 與 CSNK1D 相互作用的比率降低了 53 倍vs 7.4，表明疏水相互作用的喪失。此外，REP 2139 在 pH 6.5 下的 CSNK1D 相互作用與無活性的 REP 2031 相當。
相比之下，REP 2139 與 DNAJB12 的 REP 2139:REP 2147 相互作用在 pH 6.4 與 7.4 之間的比例增加了 40 倍，表明疏水相互作用增加。在酸性 pH 下，REP 2139 與 DNAJB12 的相互作用比 REP 2031 大 10 倍。 REP 2139 : REP 2179 比率在 pH 6.5 與 7.4 時與兩種靶標相比下降約 2 倍，表明具有相似的結合親和力。
之前 48 小時 shRNA 敲低 DNAJB12 導致分泌的 HBsAg 下降 40-50%。將此擊倒延長至 6 天可將分泌型 HBsAg 的抑制增加至 90%，這與 REP 2139 對 HBsAg 分泌的抑制作用一致。
四、研究結論
綜上所述，研究人員認為REP 2139 與 DNAJB12 的疏水性（抗病毒）相互作用在酸性 pH 值下強烈增強。這與酸化的 ERGIC 中 DNAJB12 的位置和 SVP 的組裝及其在 ERGIC 中被 NAP 的抑制一致。在 pH 6.5 時，NAPs 與胞質 CSNK1D 疏水相互作用的喪失與非生理相互作用和 CSNK1D 的敲低一致，驅動 HBeAg 的非生理抑制。
小番健康結語：我們也將此類化合物稱為乙肝表面抗原抑制劑，HEP DART 2021大會上，研究人員進一步地證明核酸聚合物（NAP）可導致乙肝表面抗原水平下降。
