作者 | 甘曉
經過同行審議，《核酸研究》近日發表了韓春雨團隊的最新論文，其前提是預設作者沒有造假行為，審稿人不會去重複該研究的實驗。未來結果如何，需要學界給出答案。
近日，河北科技大學基因編輯研究中心副教授韓春雨以通訊作者身份在Oxford academic旗下期刊Nucleic Acids Research （《核酸研究》，IF=16.971）上發表其最新成果，該論文報道了一種新的在活細胞內示蹤核糖核酸（RNA）的工具。
自2016年5月發表新基因編輯技術NgAgo論文後，韓春雨本人歷經科學質疑、論文撤稿、調查處理等種種爭議性事件。
沉寂數年後，韓春雨的最新動作再次引發關注。1月26日，《中國科學報》對其進行了採訪。
爭議後再發論文
據韓春雨介紹，“最新發表的這項研究和NgAgo沒有關聯，但也是新技術開發，或者說工具的研究發明。”他表示，“過去六年，我們一直在做工具的開發，Ago相關的工具我們也一直在做。”
《中國科學報》注意到，最新論文通訊單位為“河北科技大學基因編輯研究中心”。韓春雨解釋：“這個中心是NgAgo研究論文之後成立的，我也是在爭議之後到中心工作，目前是副教授。”
韓春雨引發的巨大爭議始於6年前。
2016年5月，國際學術期刊《自然—生物技術》（Nature Biotechnology）發表韓春雨團隊新的基因編輯技術NgAgo，在國內某網紅科學家推手的鼓譟下，被媒體以“甘坐冷板凳、十年憋大招”的故事原型炒作而走紅。隨後，國內外多名基因編輯領域科學家實名發聲，稱實驗結果難以重複，懷疑實驗結果的真實性。
2017年8月，《自然—生物技術》發表題為《是該資料說話的時候了》社論，文中宣佈韓春雨團隊已撤回該論文。
2018年9月，河北科技大學通報對韓春雨團隊撤稿論文的調查結果，認為撤稿論文已不再具備重新發表的基礎，未發現韓春雨團隊有主觀造假情況。
本次採訪中，《中國科學報》質疑當年如何得到“沒有主觀造假”的調查結果，韓春雨表示“不再解釋”。“學校考慮到涉及學術，放在公眾面前可能反而會引起一些誤解，讓我不要再去說了。”他說。
新研究是什麼？
在這篇題為“A Cas6-based RNA tracking platform functioning in a fluorescence-activation mode”的最新論文中，作者寫道：“這種基於蛋白Cas6‘分子開關’的RNA示蹤平臺具有高敏感性和高特異性。”
RNA在細胞內扮演著重要角色，已經是生物學上不爭的事實。為此，科學家們致力於在活細胞內“看”到RNA的分佈以及追蹤RNA的活動，試圖用一些分子與其結合能夠發出熒光，從而“點亮”RNA。
不過，道理雖然簡單，實現起來卻沒有那麼容易。據韓春雨介紹，目前，學界用熒光示蹤活細胞RNA有兩種方法，熒光富集（FE）型和熒光啟用（FA）型。
“富集型例如最新的Cas9或者Cas13工具具有啟發性，研究它們的文章都發表在很好的刊物上，但存在背景高、分子量巨大等問題，並不好用。”韓春雨表示，而啟用型例如基於MCP-PCP的熒光互補激發RNA示蹤工具則需要在靶RNA上連線非常長的“反應原件”附加片段，附加片段甚至遠遠大於想要看到的靶RNA本身，因此增加了產生假相的可能。
韓春雨表示，其團隊一直在嘗試開發更好用的RNA示蹤技術。近年來，一些“CRISPR/Cas6蛋白與RNA上的Cas6結合位點（CBS）相互作用”的相關研究引發其團隊的關注。
韓春雨表示，其團隊注意到Cas6結合CBS可能產生結構變化這一特點，設計出“點亮”熒光蛋白的RNA示蹤工具。具體來說，Cas6與split-Venus片段（被一分為二的熒光蛋白）構建成一個新的嵌合體示蹤蛋白，這個蛋白平時不會發光，只有與目標RNA結合時才會發出熒光。因此，他們將其命名為基於Cas6的熒光互補平臺（Cas6FC）。
簡單地說，利用這一平臺，只需要在感興趣的RNA上標記上一個反應原件，就能“開啟”Cas6FC熒光開關，從而“點亮”RNA。
論文稱，Cas6FC可以解決此前平臺面臨的高背景噪音的困難。“在活細胞中，Cas6FC可以檢測目標RNA而幾乎沒有背景噪聲。”
新發表論文的實驗做得“還不豐滿”
對於最新研究，韓春雨稱“我們是有信心的”。他表示，“重複性是不成問題的，目前，已經有一些比我們還小的實驗室在和我們合作，有一些反饋，這個工具是可以直接拿去用的，並且是好用的。”
韓春雨同時承認，新發表論文的實驗做得“還不豐滿”。“論文還是重在機理、原理，一些實操性的實驗還沒有做完整。”他表示，原因在於“人員、經費和裝置的限制。”
《中國科學報》看到，論文在“經費”一欄中標註了“河北省重點研發計劃（19272403D）”一項資助。論文共有5名作者，其中第一作者為高峰，通訊作者為韓春雨。作者中還包括河北科技大學的Zheng Ke、Jiang Feng以及主要負責熒光原位雜交技術的河北大學基礎醫學院的Li You Bo。
韓春雨曾於2019年5月在bioRxiv預印本網站上提交了關於示蹤RNA新平臺的初步文章，正文不足500字，未經同行評議。預印本文章將新平臺命名為“VN-dCasE-VC”，結論是“dCasE蛋白更適合用於活細胞的RNA追蹤”。兩年後的2021年2月，他們形成正式文章投稿《核酸研究》，12月完成修回、編輯確認，最終於2022年1月初接收。
此外，韓春雨透露，他們正在開展Ago有關的科研工作，近期會發表一些研究成果。
對於最新發表的這篇論文，《中國科學報》嘗試聯絡國內相關專家進行評價，截至發稿前尚未收到回覆。如有業內專家願意置評，請聯絡我們（[email protected]），或在留言區給出專業意見。
論文資訊：
https://doi.org/10.1093/nar/gkac014
https://doi.org/10.1101/635912
