細胞轉瓶是用於細胞和組織大規模培養的一次性細胞培養耗材,在培養細胞時,有時候我們會發現瓶子底部有沉澱,它除了可能與受到各種微生物汙染有關外,與溫度變化、濃度改變、鈣鹽、金屬等方面也有很大關係。
1、溫度變化
在細胞轉瓶培養細胞時,溫度是引起沉澱的主要因素之一。當遭遇溫度的極端變化時,高分子量血漿蛋白會從溶液中析出;熱失活和凍融迴圈能促進蛋白降解和沉澱;因為液體或重組成培養基在使用之間保持冷藏儲存,鹽可能沉澱,尤其是10x或其他濃縮的儲存液。
2、失水誘導的濃度改變
如果培養基蒸發,培養基組分(包括鹽) 的濃度將會增加,特別是培養基表面可能容易形成晶體沉澱。
3、鈣鹽
製備無血清培養基時,組分新增的順序可能導致不可溶分子的形成。鈣鹽尤其容易沉澱,比如CaCl2和MgSO4在溶液中反應產生CaSO4晶體。高壓滅菌和pH值不穩定會加劇這一問題。
4、金屬補充物
銅、鐵和鋅等金屬離子是細胞生長所必需的,是無血清培養基的重要補充物。培養系統中其他血清組分的缺失可能導致這些金屬沉澱,為細胞形成有毒的環境。
在利用細胞轉瓶培養細胞時要注意到以上幾個因素的影響,並採取相應錯誤儘可能的避免沉澱的產生,確保細胞的正常生長與增殖。
注:部分內容源於merck生命科學