摘要:
文題釋義:
神經幹細胞:是指有自我更新能力且可以發揮持續增殖以及多潛能分化功能的一類細胞,它們對於腦組織完整細胞結構的維持和正常功能的發揮具有重要作用。
DNA拓撲異構酶Ⅱ:是一類廣泛存在於生物體內的核蛋白,主要功能是調節核酸結構動態變化,在DNA複製、修復、轉錄、重組以及染色體分離等生命活動中發揮重要作用。DNA拓撲異構酶Ⅱ有2種同工酶,DNA拓撲異構酶Ⅱα主要分佈於增殖細胞中,與細胞有絲分裂中期(G2/M期)染色體DNA雙鏈的解聚與恢復有關,DNA拓撲異構酶Ⅱβ與間期細胞核內DNA構築和代謝以及rRNA轉錄有關,主要分佈於增殖不典型的細胞。
背景:胚胎期的神經幹細胞可向神經元和神經膠質細胞分化,而實際應用中希望神經幹細胞更多地分化成神經元。因此,研究神經幹細胞向神經元的定向分化機制至關重要。DNA拓撲異構酶Ⅱ是一類廣泛存在於生物體內的核蛋白,在DNA複製、修復、轉錄、重組以及染色體分離等生命活動中發揮重要作用。
目的:探討神經幹細胞及其向神經元定向分化過程中DNA拓撲異構酶Ⅱ的表達及意義。
方法:從ICR小鼠(E12.5 d)大腦皮質中分離培養神經幹細胞,將神經幹細胞球消化成單細胞後,以5×108 L-1密度接種於用Matrigel鋪底的培養皿上,加入含B27、N2、10 μg/L膠質細胞源性神經營養因子的成神經誘導分化條件培養液,誘導培養1,2,3 d採用免疫細胞化學、Western blot、實時定量PCR檢測DNA拓撲異構酶Ⅱα和β的表達。
結果與結論:①DNA拓撲異構酶Ⅱα陽性細胞在神經球內數量較多,且均勻分佈,在向神經元誘導分化後陽性細胞有所減少;DNA拓撲異構酶Ⅱβ陽性細胞在神經球內數量較少,主要分佈在神經球中央,在向神經元誘導分化後強表達的陽性細胞開始增多,在誘導分化2 d達到高峰,之後呈減少趨勢;②在神經球中DNA拓撲異構酶Ⅱα蛋白和mRNA表達較高,在向神經元誘導分化後逐漸降低;在神經球中DNA拓撲異構酶Ⅱβ蛋白和mRNA表達較低,在向神經元誘導分化後顯著增高;③透過實驗得出DNA拓撲異構酶Ⅱβ參與神經幹細胞向神經元的定向分化。
https://orcid.org/0000-0002-6326-5159(曹翠麗);https://orcid.org/0000-0002-1930-1431(孫孟軍)
中國組織工程研究雜誌出版內容重點:幹細胞;骨髓幹細胞;造血幹細胞;脂肪幹細胞;腫瘤幹細胞;胚胎幹細胞;臍帶臍血幹細胞;幹細胞誘導;幹細胞分化;組織工程
關鍵詞: 神經幹細胞, TopoⅡα, TopoⅡβ, 免疫細胞化學, 免疫印跡, 實時定量PCR
引用文字:孫孟軍, 郭建美, 周更蘇, 董澤飛, 鄭春貴, 曹翠麗. DNA拓撲異構酶Ⅱ在ICR小鼠神經幹細胞中的表達及意義[J]. 中國組織工程研究, 2022, 26(1): 84-89.
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