韓國四所科研院校研究人員，在開發檢測方法過程中，鑑定出了一種新的乙肝病毒抑制劑，並將研究成果發表在Antiviral Research。
簡單來講，韓國研究人員鑑定並發現一種α-2 腎上腺素受體激動劑——右美託咪定 (DMM)，在實驗中，它在不干擾HBVDNA分泌的前提下，可抑制傳染性病毒後代的分泌約6倍！
乙肝藥物研發實驗，透過終點稀釋法，確定一類新型抑制劑
一、實驗目的
韓國研究人員認為，定量傳染性病毒顆粒是進行體外病毒學研究基礎。為了確定體外含乙肝病毒（HBV）基因組顆粒的數量，使用定量PCR（qPCR）測量基因組當量（GEq）。然而，除了傳染性病毒粒子以外，體外還會產生含有HBVDNA的非傳染性HBV顆粒，這種背景下，可能導致在透過 qPCR分析時，高估傳染性HBV顆粒的數量。
二、實驗方法
因此，基於上述原因，韓國研究人員建立了一個終點稀釋法，可以精確地確定傳染性HBV顆粒的數量。基於HBV感染細胞模型測定使用384孔板格式，並能夠以半自動式計算50%組織培養感染劑量（TCID50）。
細胞培養衍生的HBV（HBVcc），由穩定的HBV複製細胞（HepAD38）或HBV感染的HepG2-NTCP 細胞產生，以及來源患者的HBV血清被連續稀釋並用於感染初始靶細胞。應用終點稀釋試驗，韓國研究人員用源自HepAD38-和 HepG2-NTCPsec + 細胞上清液的PEG 沉澱 HBV 感染 HepG2-NTCP 細胞，計算 TCID50/mL，轉化為空斑形成單位 (PFU)，併產生特異性傳染性（PFU/GEq 的比率）。
結果，計算出 HepAD38 和 HepG2-NTCPsec + 細胞上清液的 TCID50/mL 分別為 7.22×106 和 2.16×106，比感染力分別為 1/13,816 和 1/8798。透過免疫沉澱去除非感染性“裸露”顆粒後，特異性感染性進一步增加了大約2倍。
透過肝素柱純化 HepAD38 細胞上清液後，TCID50/mL 和特異性感染率分別提高了18倍和15倍。有趣的是，來自兩名未純化患者的HBV血清具有1/88 和 1/3609 的特異性傳染性。在將TCID50 轉換為感染複數 (MOI) 值後，研究人員根據GEq 或 MOI 值用 HBVcc 接種 HepG2-NTCP細胞，並證明基於 MOI 的感染導致更可重複的感染率。
三、實驗結論
此外，該測定使用連續稀釋的拉米夫定（一種乙肝病毒複製抑制劑）進行驗證，可抑制HBVDNA分泌和傳染性病毒後代約分別是56倍和470倍。韓國研究人員發現，我們鑑定了右美託咪定 (DMM)，它是一種α-2 腎上腺素能激動劑，可以抑制傳染性病毒後代的分泌約6倍，而不會干擾HBVDNA分泌。
綜上所述，韓國研究人員這項科學實驗的結果是，開發了一種適用於傳染性HBV顆粒的標準定量檢測方法，將右美託咪定 (DMM)鑑定為一種新型乙肝病毒抑制劑，它能夠專門干擾傳染性HBV顆粒的分泌，而並不會影響乙肝病毒基因組的分泌。
四、實驗意義和藥物開發前景
小番健康結語：總體來看，韓國四所科研院校研究人員的這項研究成果，要點包含兩個方向，第一是開發這種終點稀釋法，能夠精確測定感染性HBV顆粒的數量，可以評估HBV顆粒的特異性感染性和穩定性；第二是，透過這種方法，鑑定出了一種新型HBV抑制劑（即右美託咪定 (DMM)，以往它主要作為α-2 腎上腺素受體激動劑），研究結果已發表在Antiviral Research。
