傳代培養：原代細胞培養成功以後，需要進行分離培養，否則細胞會因生存空間不足或密度過大，營養障礙，影響細胞生長。細胞由原培養瓶內分離稀釋後傳到新的培養瓶中培養的過程稱之為傳代培養。傳代細胞允許培養的細胞擴增(形成細胞株)，可以進行細胞克隆，易於儲存，但可能喪失一些特殊的細胞和分化特徵。傳代細胞形成細胞株的最大利處在於提供了大量持久的實驗材料，便於實驗。
實驗所需裝置：
AlphaClean1300潔淨工作臺、倒置顯微鏡，HF180 二氧化碳培養箱、培養瓶、吸管、廢液缸等
實驗所需試劑：0.25％胰酶、培養基（含10％小牛血清）
實驗所需細胞：貼壁細胞株
操作步驟：
（1）入無菌室之前用肥皂洗手，用75％酒精擦拭消毒雙手
（2）倒置顯微鏡下觀察細胞形態，確定細胞是否需要傳代（傳代標準：1、掌握好細胞是否健康的標準：健康細胞的形態飽滿，折光性好，生長緻密時即可傳代。2、待細胞鋪滿瓶皿底面，即可使用。也可繼續傳代擴大培養或換成維持液。）及細胞需要稀釋的倍數。將培養用液置37℃下預熱.。
奧利巴斯倒置顯微鏡
（3）將AlphaClean1300潔淨工作臺用75%酒精或0.1％新潔爾滅溶液擦淨
（4）開啟超淨臺的紫外燈照射檯面30 min左右，關閉超淨臺的紫外燈，開啟抽風機清潔空氣，除去臭氧，建議使用AlphaClean1300潔淨工作臺，它具有紫外燈預約功能，可以根據需要提前設定好需要消毒時間段，自動執行，節省操作步驟。
HealForce AlphaClean1300可預約紫外燈滅菌的潔淨工作臺
（5）使用紅外滅菌器或點燃酒精燈；取出無菌試管，巴士德吸管和刻度吸管；安上橡皮頭；過酒精燈火焰略燒後插在無菌試管內。
（6）將培養用液瓶口用75％酒精消毒，過酒精燈火焰後斜置於酒精燈旁的架子上。
（7）吸掉或倒掉培養瓶內舊培養液。
（8）向瓶內加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆蓋培養瓶底為宜。
（9）置37℃孵箱或室溫（25℃溫度）下進行消化，2~5min後把培養瓶放在倒置顯微鏡下進行觀察，當發現胞質回縮、細胞間隙增大後，應立即中止消化。
（10）吸出消化液，向瓶內加入Hanks液少量，輕輕轉動培養瓶，把殘留消化液沖掉，然後再加培養液。如果僅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液後，可直接加入少量含血清的培養液，終止消化。
（11）使用彎頭吸管，吸取瓶內培養液，按順序反覆輕輕吹打瓶壁細胞，使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。吹打時動作要輕柔，以防用力過猛損傷細胞。
（12）用計數板計數後，分別接種於新的培養瓶中，置HF180 CO2培養箱或HF90CO2培養箱中進行培養。
HealForce HF180培養箱
（13） 細胞培養換液時間應根據細胞生長的狀態和實驗要求來確定。一般2～3d後應換一次生長液。待細胞鋪滿器皿底面，即可使用；也可繼續傳代擴大培養或換成維持液。
操作注意事項
1、掌握好細胞消化的時間，消化時間過短時，細胞不宜從瓶壁脫落，過長的消化會導致細胞脫落、損傷；
2、掌握好消化濃度，當消化液濃度過高時，消化時間應縮短，過低時細胞消化時間相對延長。
